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【流式學(xué)習(xí)】一起聊聊PNH和FLAER的故事

作者:admin信息來(lái)源:達(dá)科為日期:2019年08月01日打印字體:  
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陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)它是由1個(gè)或幾個(gè)造血干細(xì)胞上PIG-A基因突變?cè)斐傻姆菒盒缘目寺⌒约膊?,PIG-A突變?cè)斐商腔字<〈迹╣lycosyl phosphatidyl inositol,GPI)合成異常,進(jìn)而導(dǎo)致由GPI錨連在細(xì)胞膜上的一組膜蛋白丟失。臨床主要表現(xiàn)為溶血性貧血、骨髓衰竭、平滑肌張力障礙和血栓的形成。

國(guó)際PNH興趣小組將PNH分為以下三類(lèi)

  • 經(jīng)典型PNH:該患者有典型的溶血和血栓形成;

  • 合并其他骨髓衰竭性疾病:如再生性貧血(AA)或骨髓增生異常綜合征 (MDS);

  • 亞臨床型PNH:患者有輕微的PNH克隆,但沒(méi)有溶血和血栓臨床證據(jù)。

目前對(duì)PNH的診斷和檢測(cè)主要是通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析CD55和CD59在紅細(xì)胞和粒細(xì)胞上的缺失情況來(lái)判斷,但CD55、CD59等補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)還會(huì)受到其它因素的影響, 如MDS、細(xì)胞發(fā)育不全等均有可能導(dǎo)致膜蛋白的缺失,因此僅檢測(cè)CD55和CD59有一定的局限性,且容易出現(xiàn)誤診。

隨著研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)FLAER可以有效的提高檢測(cè)準(zhǔn)確率。FLAER是Alexa-488標(biāo)記無(wú)活性的嗜水氣單胞菌溶素前體的變異體,可以特異性地與GPI錨連蛋白結(jié)合,與普通氣單胞菌溶素相比,不會(huì)引起細(xì)胞溶血,并能有效的把PNH細(xì)胞(GPI-)和正常細(xì)胞(GPI+)區(qū)分開(kāi)來(lái)。但由于紅細(xì)胞表面某些糖蛋白的存在使FLAER不能很好的與錨蛋白結(jié)合, FLAER分析法一般只用于粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的檢測(cè)。

 圖:取新鮮PNH病人外周血裂紅后用FLAER染色,分析單核細(xì)胞、粒細(xì)胞中的PNH克隆數(shù) [1]。
有文獻(xiàn)報(bào)道了[2]536例疑似PNH患者FLAER分析法與傳統(tǒng)流式分析法對(duì)比結(jié)果,發(fā)現(xiàn)FLAER分析法63例患者檢測(cè)到PNH克隆,檢出率11.8%并且克隆數(shù)都較大。而傳統(tǒng)分析法只有33例患者檢測(cè)出PNH克隆,檢出率6.2%并且檢測(cè)的克隆較小。FLAER檢測(cè)微小的PNH克隆更加敏感,且不受輸血溶血的影響。常規(guī)僅可以檢測(cè)出1%的PNH細(xì)胞,而FLAER可以檢測(cè)出遠(yuǎn)小于<1%PNH細(xì)胞[3]

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參考文獻(xiàn)
  • Keeney M, Illingworth A,Sutherland DR ,etc. Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria Assessment by FlowCytometric Analysis Clin Lab Med. 2017 Dec;37(4):855-867. 

  • Sutherland DR, Kuek N, Azcona-Olivera J,etc. Use of a FLAER-based WBC assay in the primary screening of PNH clones. Am J Clin Pathol. 2009 Oct;132(4):564-72. 

  • Illingworth AJ, Marinov I, Sutherland DR.Senstive andaccurate identification of PNH clones based on ICCS/ESCCA PNH ConsensusGuidelines-A summary. nt J Lab Hematol. 2019May;41 


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